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细胞稳转株构建技术服务

一、研究背景

稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。其相对于瞬时转染而言，瞬时转染的外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量少，且在细胞系中过表达或干扰效果的维持时间很短，一般不过1至2周，仅能够满足小量蛋白的制备，大量生产成本很高。反观稳转株能够长期过表达或沉默特定基因，从而能更好地对该基因的一系列机制进行解读，在生物学研究中稳转株构建具有举足轻重的意义。

细胞稳转是通过将外源基因整合至宿主细胞染色体DNA中，建立长期稳定表达目的基因的克隆化细胞系的核心技术。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛运用的稳转株构建方法，具有高效整合，目标细胞广泛等特点。该技术包含载体构建、质粒合成、慢病毒包装、细胞转染、抗性筛选与单克隆分离几个关键阶段。相比于瞬时转染的短期表达特性，稳定转染建立的细胞系能持续表达目标蛋白超过6个月，广泛应用于基因功能研究、药物筛选和大规模蛋白生产领域。实验过程中需优化抗生素浓度、病毒转染细胞比例等核心参数，并通过Western blot或流式细胞术验证基因表达稳定性。

二、技术简介

逸漠生物采用的包装系统是二代包装系统，即三质粒系统，该系统包括1个包装质粒(psPAX2)、1 个包膜质粒(pMD2.G)、1个目的基因质粒和1株包装细胞(293T cell)。

逸漠生物采用三质粒共转染293T细胞。在转染完成后48-72 h进行病毒收获（即未纯化的细胞上清液），根据不同的试验需求，确定采用相应的浓缩纯化方法得到高浓度的病毒保存液，最后根据严格的质量标准测定慢病毒的各项指标。

在一定滴度范围内的慢病毒颗粒对目的细胞进行转染，将携带靶基因的载体导入细胞，再依据载体所含抗性标志（如真核表达载体常用的新霉素、潮霉素、嘌呤霉素等抗性筛选标志物，实际操作中常用 G418 替代新霉素），通过对应药物筛选出混合阳性克隆。

三、为什么要做细胞稳转株构建？

构建细胞稳转株（稳定表达细胞株）是细胞生物学和分子生物学研究中的重要技术手段，其核心目的是实现外源基因的持续、稳定表达，满足基础研究与应用场景的特定需求。

1、基因功能的长期研究

瞬时转染的局限性：瞬时转染（如脂质体转染）虽能短期内表达外源基因，但通常仅维持 2-7 天，无法模拟基因在细胞内的长期效应。例如，研究某肿瘤相关基因对细胞周期的影响时，需观察数周内的细胞增殖变化，稳转株可通过持续表达目的基因提供稳定的实验模型。

慢性表型分析：在神经退行性疾病研究中，需长期观察淀粉样蛋白沉积等慢性病理过程，稳转株可稳定表达致病基因（如突变型 APP 蛋白），为机制研究提供持续稳定的细胞模型。

2、信号通路与基因网络研究

某些信号通路的激活或抑制需持续刺激（如 Wnt 通路的长期激活），稳转株可通过稳定表达通路关键蛋白（如 β-catenin），避免反复转染对细胞的损伤，确保通路研究的连续性。

在基因互作研究中，稳转株可同时稳定表达多个目的基因（如荧光标记蛋白与靶基因），通过荧光追踪或质谱分析，动态监测蛋白互作网络的长期变化。

3、工业级稳定生产

单克隆抗体、重组细胞因子（如 IL-2）的生产需细胞系持续表达目标蛋白。例如，CHO（中国仓鼠卵巢细胞）稳转株经筛选后可高密度培养，每升培养基蛋白产量达克级，满足药物研发与商业化生产需求。

成本与效率优化：瞬时转染需反复操作，且蛋白产量低（通常＜100 mg/L），而稳转株可通过驯化适应无血清培养基，实现连续灌流培养，降低生产成本。

4、稳转株 vs. 瞬时转染：核心优势对比

四、操作流程

五、服务项目

过表达稳转株

干扰稳转株定制

干扰稳转株三保一

六、服务内容

过表达质粒制备/干扰序列合成

目的基因的慢病毒制备

慢病毒感染目的细胞并进行培养

稳转混合细胞株进行抗生素筛选

稳转细胞株进行qPCR检测和WB检测

七、服务流程

客户提供：细胞材料，您可以提供自己的细胞系，也可以从我们的细胞产品中选择合适的目的细胞，但是该细胞必须能够保证足够的可传代次数。

我们提供：建立稳转细胞株，以及提供建立方法，步骤及结果。

也可提供基因水平和蛋白水平的验证：稳转细胞株可以根据您的要求进行基因水平和蛋白水平的验证， 包括qPCR检测、WB检测和流式检测等。

周期：4-8 周

报价：询价

八、公司优势

团队拥有成套完善的技术体系，进行稳转细胞株构建

制备的稳转细胞株纯度高，无污染

提供完整并准确的检测方案，检测报告真实可靠

拥有低成本、高效率的制备模式，极大缩短生产周期