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脑胶质瘤类器官培养总失败?可能问题不在样本(附原代构建方案)

患者来源脑胶质瘤类器官(GBO)因能够较好保留肿瘤组织的细胞异质性、空间结构及分子特征,近年来已成为脑胶质瘤机制研究、药物筛选及精准医疗领域的重要模型。目前市面上尚缺乏成熟统一的脑胶质瘤类器官商业化培养方案,大多数实验室仍采用经典文献配方自行配制培养体系。以Jacob等发表于Cell的经典GBO体系为代表[1],已成为脑胶质瘤类器官研究的重要技术路线。

然而,实际培养过程中,研究人员仍普遍面临操作繁琐、组织粘连、类器官难成型及传代维护经验依赖度高等问题。对于珍贵的临床脑胶质瘤样本而言,建立稳定、标准化且易于推广的培养体系,已成为推动脑胶质瘤类器官研究与应用的重要需求。

针对上述需求,模基生物推出人脑胶质瘤类器官培养基(MA-0807T015),旨在为研究人员提供更加便捷、稳定的脑胶质瘤类器官培养解决方案。

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产品特点-直击科研痛点



操作更简便,无需基质胶包埋

传统培养依赖酶解+基质胶,操作繁琐;本试剂盒采用机械剪碎+摇床动态培养的模式,简化实验流程,降低操作门槛。


高效成球,类器官形成率>80%

传统基质胶包埋培养过程中,组织碎块被固定于胶内,不利于组织间相互聚集融合,类器官形成效率受样本状态影响较大。本产品采用低吸附动态悬浮培养体系,类器官形成率>80%。也有文献报道显示,悬浮培养模式的脑胶质瘤类器官建模成功率(60.5%)高于传统基质胶包埋培养(45.5%)[2],有助于提升原代样本建模效率。


标准化操作指导

针对组织粘连、难成型、传代时机无法把控等实验痛点,提供参考图谱。



多维度实验数据佐证,类器官高度复刻亲本肿瘤特征


依托实拍图像 + 病理染色结果,从生长过程、组织结构、标志物表达三重维度验证产品效果:



1、明场培养结果展示:

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胶质瘤类器官培养刚开始呈现边脱落、边增殖的生长特征:

  • 培养第一周,整体边缘不规则,镜下可见大量组织碎片、散在脱落细胞,培养基易伴随浑浊,属于正常生长现象;

  • 进入第二周,组织团逐步增大,镜下类器官轮廓清晰,形态慢慢转为圆润、微黄、质地透亮,类器官体积增大。

随着类器官体积增大,氧气与营养扩散受限,球体中心会轻度发暗,此时可对类器官进行传代培养。




2、传代培养:



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  • 类器官达到传代标准后,使用精细解剖剪刀进行机械剪切,将组织均匀分割为200~500 μm小块,以此缓解营养、氧气扩散不足的问题,预防中心实质性坏死;


  • 传代小技巧:操作时借助镊子轻柔固定类器官,严禁撕扯组织,尽量一刀完整切割,最大程度降低机械损伤。剪切后的组织块重新悬浮培养,可稳定增殖为新一代类器官,多次传代后仍能保持优异的活性。



3、组织学与荧光鉴定:证实类器官高度复刻亲本肿瘤特征


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  • H&E染色(组织学染色比对):类器官表现出和亲本组织相似的组织学特征,患者原发肿瘤组织切片与同源类器官切片,二者细胞排布、疏密程度、组织架构、细胞形态契合,完整复刻亲本肿瘤典型组织学表型;如在GBO切片中可见双核细胞、多核细胞、液泡细胞等特征性细胞形态。

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  • GFAP(胶质谱系细胞特异性标志物):GFAP是一种胶质纤维酸性蛋白,是星形胶质细胞的经典标志物;结果显示类器官GFAP阳性表达,表明模型成功保留胶质瘤细胞的胶质谱系特征,贴合原发瘤细胞组成。

  • CD31(血管内皮细胞标志物):高度血管化是脑胶质瘤最大的特点之一,类器官中检测到CD31,说明培养体系中仍然保留部分血管结构;

  • SOX2(肿瘤干细胞标志物):主要分布于类器官外周区域。作为胶质瘤干细胞的重要标志物,SOX2的富集表明类器官成功保留了具有自我更新和持续增殖能力的肿瘤干细胞群体。

免疫荧光结果表明,所构建的胶质瘤类器官不仅保留了肿瘤细胞谱系特征,还维持了胶质瘤干细胞群体及部分血管微环境成分,并形成与原发肿瘤相似的空间结构,能够满足靶向药筛选、放化疗评估、PDOX皮下成瘤等科研需求。


从患者组织到胶质瘤类器官

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1将新鲜脑胶质瘤组织收集于活组织细胞保存液(MB-0818L04L)中,最大程度维持组织活性。



2组织清洗:剔除坏死组织,保留肿瘤边缘透明的组织在含1%双抗的DPBS体系中清洗2次。


3组织修剪:保留形态透亮的活性肿瘤组织,轻柔剪切为1 mm³组织小块,操作过程避免撕扯组织。




4去除组织碎片:使用防粘附润洗液(MB-0818L03L)润洗的宽口枪头,将组织混悬液转移至润洗后的10 mL离心管,静置5分钟,待组织自然沉降后,吸除上清液。


5红细胞裂解:在组织块沉淀中加入3~5 mL红细胞裂解液(MB-0818L08L)在摇床上振荡5 min,加入5 mL上皮类器官基础培养基(MB-0818L07),轻轻混匀后静置5min,4℃下以250 g离心3分钟,弃去上清。




6组织块接种:将处理后的胶质瘤组织块接种至超低粘附六孔培养板中,每孔15~25个胶质瘤块,并加入人脑胶质瘤类器官培养基(MA-0807T015L),置于水平摇床培养。每隔两天换一次液。




7类器官形成:培养10~30天后,肿瘤组织逐渐形成边界清晰、结构稳定的脑胶质瘤类器官。



产品信息

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模基产品推荐


产品名称货号规格
Human Glioblastoma Organoid Medium Kit(人脑胶质瘤类器官培养基)MB-0807T015L500mL+500μL
MB-0807T015S5100mL*5+100μL*5
MB-0807T015S100mL+100μL
Primary Tissue Storage Solution(活组织细胞保存液)MB-0818L04L500mL
MB-0818L04S5100mL*5
MB-0818L04S100mL
Anti-Adherence Rinsing Solution(类器官防粘附润洗液)MB-0818L03L500mL
MB-0818L03S100mL
Red Blood Cell Lysis Solution(红细胞裂解液)MB-0818L08L500mL
MB-0818L08S100mL
Epithelial Organoid Basal Medium(上皮类器官基础培养基)MB-0818L07500mL



北京拜尔迪生物技术有限公司(BioDee),成立于2003年,高新技术企业,专业从事生命科学方面的服务,为客户提供试剂、耗材、仪器及技术服务等一站式产品与服务,涵盖细胞生物学、微生物学、植物学、分子生物学、生物化学、免疫学等领域。

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