hPSC诱导分化胰腺类器官试剂盒
胰腺类器官（Pancreatic Organoids）是体外三维自组装微型胰腺模型：以干细胞 / 患者原代组织为原料，在基质胶 + 定制细胞因子体系中培养，自发形成具备胰腺典型上皮结构、多细胞谱系与内分泌 / 外分泌生理功能的微器官，直径 0.3–0.8 mm，是连接 2D 细胞、动物模型与人体临床的核心研究工具。
秉承“从干细胞到功能单元”的核心技术理念，逸漠生物推出的人多能干细胞分化胰腺类器官试剂盒，采用化学成分明确的分阶段诱导体系，通过精确模拟胰腺发育过程中的关键信号通路调控，能够高效地将hPSCs定向诱导为表达PDX1和NKX6.1等关键标志物的胰腺类器官。该试剂盒为糖尿病机制研究、药物筛选及细胞治疗开发提供了标准化、可重复且功能可靠的细胞模型，助力科研人员加速相关领域的科学发现与临床转化。
1. 定向分化专业性与高纯度
采用八个阶段精准诱导策略（人多能干细胞→定型内胚层→肠管内胚层→胰腺内胚层→胰腺祖细胞→胰腺类器官），模拟体内胰腺发育过程，高效获得共表达关键标志物 PDX-1和NKX6.1 的胰腺类器官，纯度可达80%。
提供化学成分明确、无血清的完整培养体系，所有组分预优化并清晰分装，将复杂的分化流程简化为易于操作的标准化步骤，确保不同细胞系、不同批次实验的高可重复性。
3. 广泛的适用性与应用指向
适用于多种人ES和iPS细胞系，与主流干细胞培养体系兼容。分化得到的胰腺祖细胞可直接用于动物模型移植、内分泌细胞定向成熟、疾病机制研究及高通量药物筛选等多元化研究场景。
诱导分化流程
产品特点：逸漠生物这款试剂盒将复杂的胰腺发育过程转化为标准化、可预期的实验模块，帮助研究人员绕过繁琐的体系优化，直接获得高质量的功能性胰腺类器官，加速糖尿病及相关领域的科学发现与临床转化进程。
(1) 基质胶在4℃下解冻，与DMEM/F12均匀混合（基质胶:DMEM/F12=1:100），铺板，备用。
(2) DAY -1: 当hESC的汇合度达到75%-85%，吸去培养基，用2mL 1x室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗hESC，吸去PBS。
(3) 加入1mL含Y-27632（10 μM）的室温Accutase，转移到37℃ 5% CO2细胞培养箱中3-5min，使其解离成单细胞。
(4) 3-5min后，将干细胞传代培养基以等体积直接加入Accutase中，并使用P-1000吸头轻轻上下吹打细胞，制成单细胞悬液，将细胞单悬液收集到15mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
(5) 从基质胶包被的板中小心地抽吸包被液而不损坏基质胶涂层表面。
(6) 离心结束，充分去除上清，将1 mL预热的hESC/iPSC 完全培养基（含10μM Y-27632）重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。
(7) 按0.313-0.521×10⁶个细胞/cm2比例将细胞接种到步骤1制备的基质胶包被的板上，在6孔板中每孔最终体积为2 mL（含10μM Y-27632），将孔板转移到37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育24h。
(8) DAY 0: 24h后吸去培养基（密度应为100%），并加入2mL 诱导培养基S1a（成分为：基础培养基1-2，1×补充剂S1a）培养24h。
(9) DAY 1: 24h后吸去培养基，使用诱导培养基S1b（成分为：基础培养基1-2，1×补充剂S1b）换液，直到第4天，期间根据培养基颜色每天或隔天换液。
DAY 4-7:第二阶段
(1) DAY 4： 第4天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL 1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，然后从孔中移除PBS。使用2mL预热的诱导培养基S2（成分为：基础培养基1-2，1×补充剂S2）换液。
(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S2换液，直到第7天。
DAY 7-10:第三阶段
(1) DAY 7: 第7天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S3（成分为：基础培养基3-4，1×补充剂S3）换液。
(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S3换液，直到第10天。
DAY 10-14: 第四阶段
(1) DAY 10: 第10天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S4（成分为：基础培养基3-4，1×补充剂S4）换液。
(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S4换液，直到第14天。
DAY 14-17: 第五阶段
(1)DAY 14： 第14天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL 1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，然后从孔中移除PBS。
(2)加入1mL含Y-27632（10 μM）的室温Tryple，转移到37℃ 5% CO2细胞培养箱中3-5min，使其解离成单细胞。
(3)3-5min后，将DMEM/F12以等体积直接加入Tryple中，并使用P-1000吸头轻轻上下吹打细胞，制成单细胞悬液，将细胞单悬液收集到15mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
(6)吸弃上清，将解冻的基质胶和细胞沉淀放在冰盒上，用预冷枪头吸取预冷的S5诱导培养基60ul（成分为：基础培养基5-6，1×补充剂S5a，1×补充剂S5b），与细胞混匀，再用预冷枪头吸取180μL基质胶，与细胞液混匀，注意避免产生气泡。使用预冷枪头，按每孔40μL将含细胞的基质胶种到24孔板上，缓慢打入混合液时，逐渐向上移动枪头，使细胞均匀分布在胶中。
(6)放进培养箱孵育30min，使胶滴凝固。
(6)小心沿孔壁，每孔加入500μL诱导培养基S5，每天换液。
DAY 17-26: 第七-八阶段
(1)DAY 18：第18天，从培养物中抽吸培养基，使用500μL预热的诱导培养基S6（成分为：基础培养基5-6，1×补充剂S6a，1×补充剂S6b）换液。
(2) 每天使用诱导培养基S6换液，直到第21天。
(3)DAY 22：第22天，从培养物中抽吸培养基，使用500μL预热的诱导培养基S7（成分为：基础培养基7-8，1×补充剂S7a，1×补充剂S7b）换液。
(4) 每天使用诱导培养基S7换液，直到第25天。
(5)DAY 26：第26天，从培养物中抽吸培养基，使用500μL预热的诱导培养基S8（成分为：基础培养基7-8，1×补充剂S8a，1×补充剂S8b）换液。
(6)每天使用诱导培养基S8换液。至D29，胰腺类器官成熟，即可进行鉴定和相关实验。从第26天开始，一周后可传代，传代比例为1：6，可稳定传代超过6代。
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