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Myc tag Nanobody Agarose Beads
  • 产品货号:
    BN20548
  • 中文名称:
    Myc tag Nanobody Agarose Beads
  • 品牌:
    Biorigin
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN20548-500ul/25T

    500ul/25T

    ¥2800.00

  • BN20548-1ml/50T

    1ml/50T

    ¥5200.00

产品描述

产品描述:偶联 anti-Myc tag 纳米抗体的琼脂糖珠用于免疫沉淀 Myc tag(EQKLISEEDL)的融合蛋白。 

产品优势 

 没有普通抗体的轻链和重链; 

 高亲和力:解离常数达到 nM-pM 级别; 

 高载量:20ul 的 beads 悬液可以结合 2-5ug Myc tag 的融合蛋白; 

 较短的孵育时间,结合 30-120 min 即可; 

应用范围  

     可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色质免疫沉淀(ChIP)/RNA 结合蛋白免疫沉淀(RIP)、 酶活性测定、质谱分析等;

特异性  

     可以结合 Myc tag 的融合蛋白。 

产品特性 

     存储缓冲液:PBS(含有 20%乙醇)。 

     保存条件:可在 4℃保存至少 1 个月,在-20 度或-80℃保存 1 年,避免高速离心,干燥和反复冻融。

实验原理

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实验步骤: 

     收集细胞: 每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 的哺乳动物细胞(约一个 10 厘米培养皿)表达绿色荧光蛋白融合蛋白。吸出生长培 养基、向培养皿中加入 2 毫升预冷的 PBS 洗涤细胞 2 次,利用细胞刮或胰酶消化的方法收集贴壁细胞,细胞转移到离心 管,500 g 离心 3-5 分钟并丢弃上清液。 

细胞裂解: 

     1.用 500 ul 预冷的裂解缓冲液重悬细胞,在裂解缓冲液中加入蛋白酶抑制剂(自备)。对于膜蛋白或核/染色质蛋白, 可使用 RIPA 裂解液(货号:BN25012)中加入蛋白酶抑制剂(货号:BN25002)。 

     2.把离心管放置在冰上 30 分钟,可以每 10 分钟充分吹打一次。 

     3.细胞裂解产物在 4℃,20,000 g 条件下离心 15 分钟,转移裂解产物到一个新的预冷管中,丢弃沉淀。注意:此时细胞 裂解产物可以放在-80℃进行长期储存。 平衡珠子:

     4.振荡混匀 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads,吸取 20ul beads 悬液到 500 ul 预冷的裂解缓冲液中,在 4 ℃,2,500  g 条件下离心 3 分钟,丢弃上清液。(此步骤可选)

结合蛋白  

     5. 将细胞裂解产物加入到平衡的 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads 中(如果未做第 4 步,可在细胞裂解产物中直接加入 20ul beads 悬液),在 4 ℃冷柜中的旋转混合仪上结合 30-120 min。如果需要,保存 50 ul 的裂解产物进行免疫印迹分析。 

     6. 在 4 ℃,2,500 g 条件下离心 3 分钟,丢弃上清液。

清洗珠子:  

     7. 用 500 ul 预冷的裂解缓冲液中洗涤 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads,在 4 ℃,2,500 g 条件下离心 3 分钟,丢弃 上清液并重复洗涤 2 次。(可选:在第二次洗涤的步骤中增加盐浓度到 500 mM)。 

洗脱蛋白: 

方法一: 

     8. 加入 20ul 2X SDS-sample buffer 重悬 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads。在 95℃条件下加热 10 min,把免疫沉淀 复合物从珠子上游离出来,然后在 4 ℃,2,500 g 条件下离心 3 分钟收集上清,进行免疫印迹分析。 

方法二: 

     9. 替代步骤 8 的可选步骤:加入 50ul 0.2 M pH2.5 的甘氨酸洗脱结合的蛋白,建议孵育时间 30 秒,并不断混匀,随后离心,转移上清液到新管中,为了中和酸性的甘氨酸,需添加 5ul 1.0 M Tris(pH10.4)。注意:为了提高洗脱效率可 以重复这一步。 

方法三: 

     10. 替代步骤 8 或 9 的可选步骤:也可以加入过量的 Myc tag 的多肽进行洗脱。

产品效果:

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