Q1. 血清应该是什么颜色的?
 
A1. 血清的颜色受多种因素影响,不同批次的血清的颜色很可能有较大的差异。颜色可能是金黄色、红色、琥珀色或介于三者之间。血清的颜色与产品的品质没有直接的关系。
 
Q2. 如何保存血清?
 
A2. 血清应该保存在-15℃至-25℃,存放到-70℃也可以。因为多数情况下,一瓶 500ml 的血清不能一次用完,所以建议一次性将血清分装成一次性能够用完的体积(多分装成 40ml)。若存放在4℃,不建议超过一个月。
 
Q3. 如何解冻血清?
 
A3. 瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): -20℃或-70℃至 4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由-20℃至 37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
 
Q4. 血清解冻后发现有絮状物,改如何处理?
 
A4. 血清中絮状物的出现有许多种原因,最常见的原因是血清中脂蛋白变性;血纤维蛋白(凝血蛋白之一)也是血清解冻后出现絮状物的主要原因之一。这些絮状物不会影响血清的质量和使用。使用的时候,移液管能避开絮状物,则无须任何处理,直接用移液管将血清加入培养基即可。如果希望去除絮状物,建议将血清分装至无菌离心管内,以 400g 离心力短暂离心,再取离心后的上清使用。不建议使用过滤的方式去除絮状物,因为絮状物会堵塞滤膜。
 
Q5. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?
 
A5. 胎牛血清没有预老化,储存在 2-8℃时,血清中的各种蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊物。这些沉淀的产生不会影响血清的使用效果。

Q6. 如何避免血清中沉淀物的产生?
 
A6. 我们建议在使用血清的时候,注意下列操作:
  • 解冻血清时,请按照上述逐步解冻法。不建议直接将血清从-20℃或-70℃直接放到 37℃水浴中解冻。温度剧烈变化会导致沉淀物和黑点的产生。 
  • 解冻血清时,请随时轻轻摇晃,使成分和温度均一,减少温度不均匀导致的沉淀发生。 
  • 请勿将血清置于 37℃太久。若在 37℃放置太久,血清会变混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,影响血清质量。
  • 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,无需做此步骤。
  • 若必须做血清的热灭活,请遵守 56℃、30 分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
 
Q7. 为什么要热灭活血清?
 

A7. 加热可以灭活补体系统。激活的补体会参与溶解细胞,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究、培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活的血清。
 
Q8. 有必要对血清都进行热灭活吗?
 

A8. 实验显示,热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有作用,甚至可能因为高温处理影响了血清的质量,造成细胞生长速率降低。经过热处理的血清,沉淀物会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在 37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误以为是微生物的分裂扩增。
 
Q9. 如何正确地进行血清灭活?
 

A9. 热灭活时请将血清置于 56℃水浴中 30 分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响,一次灭活的血清体积不宜过大。最好准备同样的容器装相等体积的水(与血清相同温度)。灭活时将装有血清和水的容器同时放入 56℃水浴,在装水的容器中放置温度计,加热过程中不时轻轻旋转混匀血清,当温度计显示达到 56℃左右,才开始计时。

Q10. 血清中观察到小黑点,是否为黑胶虫?
 
A10. 个别实验室人员在含血清的培养体系中观察到小黑点,认为是黑胶虫。事实上这种黑色物质可能是血清或培养基中的蛋白/盐分子的结晶。该物质在培养体系中的运动是布朗运动,是液体的作用导致,不是生物体的自主运动。而且从未有任何实验室从该黑色物质中分离出生物遗传物质。随着培养体系在 37℃的放置时间的增加,沉淀的形成会增多。正确的解冻和灭活(无必要的情况下无须热灭活)可以减少黑点的产生。
 
Q11. 血清在运输过程中(部分)融化,是否能继续使用?
 
A11. 血清在生产运输过程中会经历数次冻融的过程,在一定范围之内不会影响血清品质。运输过程中出现部分化冻的血清可以正常使用。但是血清的使用过程中应将冻融过程的数量控制在最低。